产品货号：
GS0035
中文名称：
柱式质粒DNA中量抽提试剂盒(50～80mL)
英文名称：
UNlQ-200 Column Plasmid Mid-Preps Kit(50-80mL)
产品规格：
10次|20次
发货周期：
1～3天
产品价格：
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本试剂盒提取原理与SgPrep柱式质粒DNA小量抽提试剂盒相同。不同的是本试剂盒使用SPIN200吸附柱，吸附能力更强，可一次获得200μg质粒。
保存：室温（15～25℃）保存，有效期见包装。加入RNase A后，Buffer P1请存放于2～8℃，有效期为半年。其他组分可于室温保存，长期存放请置于2～8℃。
Buffer P3中含有刺激性的化合物，操作过程中应穿上实验服，戴好乳胶手套，避免沾染皮肤、眼睛和衣服，防止吸入口鼻。沾染皮肤或眼睛后，请立即用清水或生理盐水冲洗，必要时寻求医生的帮助。
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- 操作过程快速、方便。整个抽提过程可以在40分钟左右完成。
- 无需使用酚抽提，无需乙醇沉淀，抽提得到的质粒纯度高。
- 新型裂解染料Visualysis让裂解过程可视化，实现质粒得率最大化。
- SPIN200吸附柱有效容积为17mL，从100～500mL过夜培养菌液中提取多达200μg高纯质粒。
| 组分 | 10次 | 20次 |
| Buffer P1 | 55mL | 110mL |
| Buffer P2 | 55mL | 110mL |
| Buffer P3 | 75mL | 2×75mL |
| Buffer DW1 | 55mL | 110mL |
| Wash Solution（浓缩液） | 24mL | 2×24mL |
| Elution Buffer | 15mL | 30mL |
| RNase A | 0.8mL | 1.6mL |
| Visualysis | 250μL | 500μL |
| 吸附柱和2个收集管 | 10套 | 20套 |
保存：室温（15～25℃）保存，有效期见包装。加入RNase A后，Buffer P1请存放于2～8℃，有效期为半年。其他组分可于室温保存，长期存放请置于2～8℃。
Buffer P3中含有刺激性的化合物，操作过程中应穿上实验服，戴好乳胶手套，避免沾染皮肤、眼睛和衣服，防止吸入口鼻。沾染皮肤或眼睛后，请立即用清水或生理盐水冲洗，必要时寻求医生的帮助。
- 自备试剂：无水乙醇等。
- 试剂盒初次开启，将RNase A全部加入至Buffer P1中，混匀后在瓶身做好标记，储存于2～8℃，有效期为6个月。
- Buffer P2和Buffer P3在低温下可能产生沉淀，使用前请检查，如有沉淀，请于37℃溶解，待冷却至室温后使用。
- 按瓶身标签说明在Wash Solution中加入4倍体积的无水乙醇，混匀后在瓶身做好标记，于室温密封保存。每次使用后将瓶盖盖紧，以保持Wash Solution中的乙醇含量。若Wash Solution由于运输或保管不当造成容量不准，请用量筒定容后再加入相应体积的无水乙醇。
- 提前将水浴锅调至60℃备用。
- 在含合适抗生素的培养基中接种目标菌株，于37℃摇床充分振荡培养12～16h。
- 菌液状态对质粒得率非常关键，请用不超过容器容量1/4体积的培养基进行培养。
- 处于生长平台期的菌体用于质粒抽提得率最高，过度培养可能导致DNA降解。
- 菌液状态对质粒得率非常关键，请用不超过容器容量1/4体积的培养基进行培养。
- 对于高拷贝质粒，取50～80mL菌液，10000rpm离心3min收集菌体，倒尽或吸干培养基。
- 菌液用量与菌液浓度密切相关，建议最大菌液用量不要超过250/OD600mL。
- 对于低拷贝数的质粒，请用150mL菌液，同时按比例相应提高Buffer P1、Buffer P2和Buffer P3的用量。
- 如果使用更多的菌液，则同一个样品分多管收集，分别裂解，合并同一个样品的各管裂解液通过同一个吸附柱来获得更高的得率。
- 菌液用量与菌液浓度密切相关，建议最大菌液用量不要超过250/OD600mL。
- 在菌体沉淀中加入5mL Buffer P1，吸打或振荡至彻底悬浮菌体。
- Buffer P1首次使用时请检查是否已加入RNase A。
- 一定要彻底悬浮菌体，否则影响得率和质量。
- 如果使用Visualysis，则在加入5mL P1后再加入20μL Visualysis，振荡混匀。
- Visualysis需在临用前加入，直接加入到Buffer P1中出现浑浊为正常现象。
- Buffer P1首次使用时请检查是否已加入RNase A。
- 加入5mL Buffer P2，立即温和颠倒离心管5～10次混匀，室温静置2～4min。
- 裂解时间与菌量相关，菌量多则适当延长时间，最长不能超过5分钟。
- 如果同时操作多个样品，每加入一管混匀一管，不要采用全部加入一起混匀的方法，计时从第一管样品加入开始。
- 以溶液由浑浊变澄清且粘稠，为裂解完全的标志。
- 裂解时间与菌量相关，菌量多则适当延长时间，最长不能超过5分钟。
- 加入7mL Buffer P3，立即上下颠倒5～10次，室温放置5min。
- 如果同时操作多个样品，每加入一管混匀一管，不要采用全部加入一起混匀的方法。加入Buffer P3后，离心管中会立即出现大量白色絮状沉淀。
- 如果起始菌液较多，混匀后室温静置2分钟以彻底去除RNA。
- 如果同时操作多个样品，每加入一管混匀一管，不要采用全部加入一起混匀的方法。加入Buffer P3后，离心管中会立即出现大量白色絮状沉淀。
- （可选）90℃水浴8min，取出后-20℃放置10min，继续步骤7。
- 此步骤可以充分去除杂蛋白，确保杂蛋白在离心时完全沉淀。
- 12000rpm离心15min。
- 离心后溶液应为澄清的，如果还混有微小悬浮物可再次离心，或延长离心时间，待完全沉淀后再取上清。
- 将上清全部小心移入吸附柱，室温放置5min，8000rpm离心2min。倒掉收集管中的液体，将吸附柱放入同一个收集管中。
- 如果裂解液较多，可以重复该步骤直到至所有裂解液流过吸附柱。
- 不要吸取到沉淀，否则会出现基因组DNA和蛋白质污染。
- 如果上清中有沉淀浮起，可以将一片滤纸折叠成漏斗型装在吸附柱上，对倒入的上清进行过滤。
- 如果裂解液较多，可以重复该步骤直到至所有裂解液流过吸附柱。
- （可选）向吸附柱中加入5mL Buffer DW1，8000rpm离心2min。倒掉收集管中的液体，将吸附柱放入同一个收集管中。
- 向吸附柱中加入5mL Wash Solution，8000rpm离心2min。倒掉收集管中的液体，将吸附柱放入同一个收集管中。
- Wash Solution首次使用前请检查是否已加入正确量的无水乙醇。
- 重复步骤10一次。
- 将空吸附柱和收集管放入离心机，10000rpm离心2min。
- 此步绝不可省略，否则残余的乙醇会严重影响得率和后续实验。
- 可将离心后的吸附柱放入恒温箱中50℃干燥5分钟，或自然晾干10分钟。有助于乙醇挥发完全。
- 此步绝不可省略，否则残余的乙醇会严重影响得率和后续实验。
- 将吸附柱放入干净的50mL离心管中，在吸附膜中央加入0.5～1mL Elution Buffer，室温静置2min，10000rpm离心2min。将所得到的质粒DNA溶液置于-20℃保存或用于后续试验。
- Elution Buffer为2.5mM Tris-HCl，pH8.5，可以用TE或水（pH＞7.0）代替。
- 将Elution Buffer预热至60℃可以进一步提高得率。
- 请勿使用小于400μL的洗脱液进行洗脱。
- Elution Buffer为2.5mM Tris-HCl，pH8.5，可以用TE或水（pH＞7.0）代替。
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